检测意义及原理
总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)是衡量机体内酶系统、小分子物质及蛋白质等抗氧化成分综合能力的指标,通过清除自由基、阻断氧化应激等氧化链式反应机制从而保护机体免受氧化损伤。在生物体中,氧化应激和抗氧化能力的平衡对于维持正常的生理功能至关重要。抗氧化系统包括抗氧化剂(如维生素C、维生素E、谷胱甘肽、类胡萝卜素、黄酮类等)和抗氧化酶(如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等)。T-AOC检测通过评估样品中抗氧化剂及抗氧化酶的总能力来反映其应对氧化应激的整体潜力。T-AOC的检测广泛应用于生物医学、营养学、食品科学、药物研发及环境毒理学等领域。
本试剂盒采用可见光比色法在酶标板上操作,标准品和待测样品中的抗氧化物质与显色液发生反应,导致显色液在431和723nm处的特征性吸收峰降低,抗氧化能力与此OD值降低成正比;以常用的抗氧化物质Trolox的OD值降低做标准对照,可通过绘制标准曲线求出样品的总抗氧化能力。标本收集
组织标本:按照动物组织质量(g):提取液mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心5min,取上清置于冰浴中待测。
2. 细菌或细胞标本:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL 提取液)加入提取液,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min)。然后12000rpm 4℃离心5min,取上清置于冰浴中待测。
3. 血清等液体标本:直接测定。
备注:待测样本应尽早检测,2~8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。1. 加待测样本:将配制好的标准液及待测样品各取5µL加入到酶标板孔内。
2. 加显色液 :每个标准液及待测样品酶标板孔内加入显色液195µL;混匀,室温静置15min。
3. 读 数 :将酶标板放入酶标仪中,在431或723nm处读OD值。
注意事项
1. 请自备1.5mL离心管及离心管架等常规检测设备及仪器。
2. 正式测定之前选择2~3个预期差异大的样本做预测定,以熟悉实验流程。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温,试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1个月内用完。
4. 严重脂血对结果有影响,应注意避免。
5. 实验前请认真仔细阅读此说明书,说明书以试剂盒内纸质版为准。
本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断,请穿实验服并戴一次性口罩和手套操作