检测意义及原理
乳酸(Lactic acid,LA)是生物体代谢过程中重要的中间产物,它与糖、脂类、蛋白质及细胞内能量代谢密切相关,因此乳酸含量是评估糖原代谢和有氧代谢的重要指标。乳酸根据其旋光性的不同,分为L-乳酸和D-乳酸两种,其中真核生物体内主要是L-乳酸。L-乳酸含量的异常升高与组织缺氧﹑肝损伤﹑糖尿病和恶性肿瘤等多种疾病密切相关。
标本收集
组织标本:将组织块用PBS漂洗干净,按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,12000g 4℃离心10min,取上清混匀后置冰上待测。
2. 细菌或细胞标本:按细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.5mL提取液)重悬浮细胞,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);12000g 4℃离心10min,取上清液置冰上待测。
3. 血清等液体标本:应使用一次性的无热原,无内毒素试管(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可),血清、血浆 避免使用溶血,高血脂标本,标本悬浮物应离心去除,使标本清澈透明,液体样品直接检测。
备注:待测样本应尽早检测,2-8℃保存一周;更长时间须冷冻(-20℃或-80℃)保存,避免反复冻融。
检测程序
酶标仪预热:打开酶标仪,37℃预热30min。
2. 加待测样本:将配置好的标准液及待测样品各取20µL加入到紫外微孔板中。
3. 加显色溶液:每个标准液及待测样品孔内加入显色液200µL,混匀。
4. 孵育及读数:将上述紫外微孔板即刻放入酶标仪中,升温到37℃时开始计时,孵育30min;在342nm处读OD值。
注意事项
1. 请自备1.5mL离心管及离心管架等常规检测设备及仪器。
2. 正式测定之前选择2~3个预期差异大的样本做预测定,以熟悉实验流程。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温,试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1个月内用完。
4. 实验前请认真仔细阅读此说明书,说明书以试剂盒内纸质版为准。
5. 血清抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好,不可用草酸抗凝剂。
6. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
7.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性口罩和手套操作。