检测意义及原理
尿素氮(BUN),是机体蛋白质的代谢终产物,主要由肾脏以尿液形式排出体外。临床上尿素氮测定有助于诸如肾功能衰竭、肾炎、泌尿道梗阻等疾病的早期诊断和疗效评估。
本试剂盒采用可见光比色法在酶标板上操作,标准品和待测样品中的尿素氮与显色液发生反应,在525nm处测OD值,尿素氮含量与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出样品中尿素氮浓度。
标本收集
组织标本:将组织块用PBS漂洗干净,按照组织质量(g): 双蒸水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL双蒸水)进行冰浴匀浆,然后12000g室温离心10min,取上清混匀后待测。
2. 细菌或细胞标本:按细胞数量(104个):双蒸水体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入0.5mL双蒸水)重悬浮细胞,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);12000g 4℃离心10min,取上清液置冰上待测。
3. 血清等液体标本:血清(浆)直接测定。尿液用生理盐水做1:10~1:50稀释后与血清(浆)操作相同。
检测程序
加待测样本:将配制好的标准液及待测样品各取25µL加入到1.5mL离心管中。
2. 加反应溶液:每个标准液及待测样品离心管内加入反应液1375µL,混匀。
3. 孵育及读数:将上述标准液及待测样品离心管放入100℃沸水浴中孵育15min,取出后在冷水中冷却2min。然后转移到酶标板中(每个酶标孔加溶液100µL),在525nm处读OD值。
注意事项
1. 请自备离心管及离心管架等常规检测设备及仪器。
2. 正式测定之前选择2~3个预期差异大的样本做预测定,以熟悉实验流程。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温,试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1个月内用完。
4. 实验前请认真仔细阅读此说明书,说明书以试剂盒内纸质版为准。
5. 实验中最好采用质量好的1.5mL离心管,以免沸水浴时离心管盖子自动崩开影响实验结果。
6. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性口罩和手套操作。