TMB 显色异常排查指南

显色过深 / 高背景

- 洗涤不充分：增加洗涤次数至 6 次，每次浸泡 60 秒

- 抗体浓度过高：用棋盘滴定法优化抗体浓度

- 显色时间过长：控制显色在 10-15 分钟，提前准备好终止液

- 底物受污染：底物应现配现用，避免接触金属离子

## 显色过浅 / 信号弱

- 抗体失活：检查保存条件，避免反复冻融

- 孵育温度不足：确保 37°C 恒温孵育

- HRP 抑制剂：检查样本中是否含叠氮钠（NaN₃）

- 底物失效：检查底物有效期，TMB 应无色透明

## 显色不均匀

- 加样气泡：加样时沿孔壁缓慢加入，避免气泡

- 板底异物：读数前检查板底清洁度

- 孵育震动：孵育过程中避免移动或震动微孔板