ELISA 与 Western Blot 结果不一致怎么办

理解方法学差异

| 维度 | ELISA | Western Blot |

|------|-------|--------------|

| 检测对象 | 天然构象蛋白 | 变性后蛋白 |

| 灵敏度 | pg/mL 级 | ng 级 |

| 特异性 | 依赖抗体对 | 依赖抗体+分子量 |

| 定量能力 | 精确定量 | 半定量 |

## 排查步骤

1. 确认检测的是同一蛋白

- ELISA 抗体识别的是天然表位

- WB 抗体识别的是线性表位（变性后暴露）

- 如果蛋白存在翻译后修饰，两种方法可能检测不同形式

2. 检查样本处理差异

- ELISA 使用天然样本上清

- WB 需要变性处理，可能破坏某些表位

- 样本中若存在蛋白酶，WB 处理过程中可能降解目标蛋白

3. 抗体特异性验证

- 用重组蛋白做阳性对照

- 做抗体 knockout 验证

- 查看抗体数据表中的验证数据

4. 结果解读原则

- 两种方法结果不一致 ≠ 其中一种是错误的

- 结合实验目的选择参考方法

- 必要时用第三种方法（如流式、质谱）交叉验证