低丰度样本检测灵敏度优化

样本预处理策略

- 超滤浓缩：截留分子量选择适当，避免目标物损失

- 免疫沉淀：使用抗体富集目标蛋白，浓缩 10-100 倍

- 去除高丰度蛋白：白蛋白/IgG 去除试剂盒，降低基质干扰

## 反应条件优化

- 延长孵育：37°C 孵育延长至 2-3 小时

- 过夜孵育：4°C 过夜可提高低丰度检出率 2-5 倍

- 抗体浓度上调：在信噪比可接受范围内适当提高抗体浓度

## 信号放大技术

- 生物素-链霉亲和素系统：信号放大 3-5 倍

- 酪胺信号放大（TSA）：灵敏度提升 10-100 倍

- 荧光底物替代显色底物：动态范围更宽

## 常见误区

- 单纯延长显色时间：背景同步升高，信噪比未必改善

- 过度浓缩样本：高丰度干扰蛋白同步浓缩，反而增加背景

- 忽视基质效应：浓缩后基质效应更显著