标准曲线不理想?常见原因与对策
从曲线形状到相关系数,全面解析标准曲线异常的排查方法。
标准曲线线性差(R² < 0.99)
- 标准品降解:分装保存,避免反复冻融
- 加样误差:校准移液器,使用排枪加样
- 孵育条件不当:严格控制温度和时间
## 高浓度点信号饱和
- 显色时间过长:缩短显色至 10 分钟
- 抗体浓度过高:适当稀释检测抗体
- 标准品浓度过高:降低最高浓度点
## 低浓度点信号过低
- 灵敏度不足:检查抗体效价,必要时更换试剂盒
- 非特异性结合:增加封闭时间或更换封闭液
## 曲线不对称
- 使用五参数逻辑回归(5-PL)代替四参数(4-PL)
- 检查标准品纯度

