高背景值 troubleshooting

原因 1：洗涤不充分

解决：每孔加液 ≥300μL，洗涤 5-6 次，每次浸泡 30-60 秒。最后一次拍干，避免残留。

## 原因 2：封闭不足

解决：使用 1-5% BSA 或 5% 脱脂奶粉封闭 1-2 小时。某些情况下需过夜封闭。

## 原因 3：抗体浓度过高

解决：棋盘滴定法确定最佳抗体浓度。通常稀释 1000-10000 倍。

## 原因 4：交叉反应

解决：更换特异性更高的抗体对，或选择不同表位的抗体。

## 原因 5：样本基质干扰

解决：样本适当稀释（1:2 至 1:10），或使用样本稀释液。

## 原因 6：底物污染

解决：底物现配现用，避免接触金属器具，使用一次性塑料容器。

## 原因 7：孵育温度过高

解决：严格控制 37°C，避免超过 40°C。

## 原因 8：酶标仪设置错误

解决：确认波长正确（TMB 通常为 450nm，需设参比波长 630nm）。