细胞培养上清 ELISA 检测要点

培养条件标准化

- 血清批次一致：不同 FBS 批次成分差异大，更换时需做平行验证

- 接种密度统一：过密培养会导致营养耗尽、代谢物累积

- 换液时间固定：建议检测前 24 小时换液，减少血清干扰

## 上清采集要点

- 避免细胞破裂：轻柔吸取，离心去除细胞碎片（300g, 5min）

- 抑制蛋白酶：上清中可加入 PMSF 或蛋白酶抑制剂混合物

- 及时检测：新鲜上清优于冻存样本

## 实操技巧

- 设置培养基空白对照，排除血清本底干扰

- 高浓度样本稀释至曲线中段，避免 Hook 效应

- 多次冻融会显著降低细胞因子检出率

## 常见误区

- 直接检测含血清培养基：血清蛋白会竞争结合位点

- 忽视细胞密度影响：同一处理不同密度结果差异可达数倍

- 未设无细胞培养基对照：无法区分培养基本底与真实分泌